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投稿时间：2023-04-25
投稿时间：2023-04-25
中文摘要: 为挖掘蔗糖磷酸化酶（sucrose phosphorylase，SPase）合成蜜二糖的潜力、降低蜜二糖制备的工业成本，该研究利用大肠杆菌对SPase 基因进行异源表达，通过镍柱纯化后表征其酶学性质，采用响应面试验优化合成蜜二糖的最佳反应条件，成功将芒果源肠膜明串珠菌（Leuconostoc mesenteroides）的SPase 基因在大肠杆菌BL21（DE3）中表达，获得可溶性SPase。酶学性质研究结果表明其比酶活为78 U/mg，最适反应温度和pH 值分别为40 ℃和6.0。以此为基础利用SPase 进行蜜二糖的合成优化，结果表明，在40 ℃条件下，添加200 g/L 蔗糖、400 g/L D-半乳糖和390 U/L 的SPase，反应24 h 最高可获得浓度为（34.20±0.92） g/L 的蜜二糖。
中文关键词: 蔗糖磷酸化酶（SPase） 基因克隆 基因表达 功能性低聚糖 蜜二糖
Abstract:To explore the potential of sucrose phosphorylase （SPase） in synthesizing melibiose and reduce the industrial cost of melibiose production，this study employed Escherichia. coli for the heterologous expression of the SPase. The enzymatic properties were characterized by nickel column purification. The optimal reaction conditions for synthesizing melibiose were determined through response surface experiments. The SPase from Leuconostoc mesenteroides was successfully expressed in E.coli BL21 （DE3），yielding the soluble SPase. Enzymatic property studies revealed an enzyme activity of 78 U/mg，with an optimum reaction temperature of 40 ℃and pH of 6.0. Subsequently，melibiose synthesis was optimized using SPase，showing that the highest concentration of trehalose obtained after 24 h of reaction was （34.20±0.92） g/L when the temperature was 40 ℃，with the addition of 200 g/L sucrose，400 g/L D-galactose，and 390 U/L SPase.
keywords: sucrose phosphorylase（SPase） gene cloning gene expression functional oligosaccharide melibiose
文章编号：202416023 中图分类号： 文献标志码：
基金项目:广东省重点领域研发计划项目（2022B0202050002）
| 作者 | 单位 |
| 张瑾1，2，谢露1，郭丽琼1，2，叶志伟1，2，魏韬1，2，林俊芳1，2 * | 1.华南农业大学 食品学院，广东 广州 510640；2.广东省微生态制剂工程技术研究中心，广东 广州 510640 |
引用文本：
津ICP备20000603号-1