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投稿时间：2016-07-18
投稿时间：2016-07-18
中文摘要: 探索化学发光磁酶免疫分析技术在单核细胞增生性李斯特菌检测中的应用，并初步建立和优化检测方法及条 件。将抗 LM 兔多抗与磁性微球偶联构建免疫磁分离原件，应用双抗夹心法 ELISA 检测 LM 全菌抗原，应用化学发光法 进行定量检测，应用正交设计优化主要反应条件，建立标准曲线，测试灵敏性与特异性。通过正交试验优化的反应条件 为 37 ℃条件下，免疫磁珠用量 20 μL、含 0.1 %BSA 的 PBS 封闭 15 min，捕获抗原 2 h，HRP 标记的抗 LM 单抗稀释至 1 ∶ 10 000（体积比）特异性结合反应 30 min 后进行化学发光检测，标准曲线拟合优度 0.954，最低检出限 104 CFU/mL，特 异性良好，检测时限为 3 h ~4 h。
Abstract:To explore the application of chemiluminescent magnetic enzyme immunoassay in the detection of Listeria monocytogenes， and to establish and optimize the detection methods and conditions. The magnetic beads were coupled with rabbit anti LM polyclonal antibody to structure the original of immunomagnetic sepa－ ration. L. monocytogenes was detected by chemiluminescence through double antibody sandwich ELISA. Or－ thogonal design was used to optimize the reaction conditions， and to establish the standard curve， the sensitivity and specificity were tested. Through orthogonal design， the optimization of reaction conditions were in 37 ℃， immunomagnetic bead dosage of 20 μL， containing 0.1 % BSA in PBS blocking 15 min， antigen captured 2 h and HRP labeled anti LM monoclonal antibody dilution to 1 ∶ 10 000（体积比）specificity binding reaction 30 min after chemiluminescence detection. The goodness of fit of standard curve is 0.954， the minimum detection limit is 104 CFU/mL， the specificity is good， and the detection time is 3 h-4 h.
文章编号：201703027 中图分类号： 文献标志码：A
基金项目:国家重大科学仪器设备开发专项（2013YQ14037106）
| 作者 | 单位 |
| 范龙兴1，2，宁保安2，孙智勇3，白家磊2，彭媛2，曲晓辰1，刘超2，乌恩琦1，高志贤2，*，刘颖1，* | 1. 内蒙古医科大学 公共卫生学院，内蒙古 呼和浩特 010110；2. 军事医学科学院 卫生学环境医学研究 所 天津市环境与食品安全风险监控技术重点实验室，天津 300050；3. 中国人民解放军第十一医院，新疆 伊宁 835000 |
引用文本：
津ICP备20000603号-1