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投稿时间：2019-06-18
投稿时间：2019-06-18
中文摘要: 将Bacillus sphaericus 2297蛋白酶基因osp在Bacillus subtilis WB800异源表达，并进行纯化和酶学性质研究。以Bacillus sphaericus DS11基因组DNA为模板，扩增osp基因，构建重组质粒pMA0911-His6-osp，重组质粒转化Bacillus subtilis WB800获得重组表达菌株Bacillus subtilis WB800-pMA0911-His6-osp。利用镍离子柱亲和层析纯化重组酶至电泳纯。重组酶最适催化温度和pH值分别为40℃和pH 8.0，在20℃～30℃下保温10 h保持80%以上酶活力，在 pH 7.0～9.0 处理 24 h 保持 60%以上酶活力；Sr2+、K+、Mg2+对酶活有促进作用，Fe3+、Ba2+、Ca2+对酶活有抑制作用；重组蛋白酶在极性常数为0.8～3.1的有机溶剂中孵育6 d后保持53%以上的酶活力。
中文关键词: Bacillus sphaericus DS11 蛋白酶 异源表达 有机溶剂稳定性 酶学性质
Abstract:The protease gene osp of Bacillus sphaericus 2297 was expressed in Bacillus subtilis WB800.The recombinant ovarian-specific promoter（OSP）was purified and characterized.The osp was amplified with Bacillus sphaericus DS11 genomic DNA as template.The recombinant plasmid pMA0911-His6-osp was constructed and transferred into B.subtilis WB800.The recombinant OSP was purified with Ni2+-chelate affinity chromatography.The optimum temperature and pH of the recombinant OSP were 40℃ and 8.0，respectively.It exhibited high stability when the temperature range from 20℃ to 30℃ and pH value range from 7.0 to 9.0，more than 80%activity was retained when incubated at 20℃-30℃for 10 h，and retained more than 60%activity after treated at pH 7.0-9.0 for 24 h.The enzyme activity could be enhanced in the presence of Sr2+，K+and Mg2+，while inhibited by Fe3+，Ba2+and Ca2+.The recombinant protease maintained an enzyme activity of over 53%after 6 days of incubation in an organic solvent with a polar constant of 0.8-3.1.
文章编号：202012002 中图分类号： 文献标志码：
基金项目:国家自然科学基金项目（31772016）；江苏省海洋科技创新专项（HY2018-10）；江苏省“六大人才高峰”第十二批高层次人才项目（swyy-195）；江苏省“333高层次人才培养工程”；连云港市“521工程”项目；江苏省研究生科研与实践创新计划项目（SJCX19_0954）
| 作者 | 单位 |
| 柴金龙，胡晟源，陈丽，王淑军，焦豫良，杨杰，刘姝，房耀维 | 江苏海洋大学海洋生命与水产学院，江苏连云港222005；江苏省海洋资源开发研究院，江苏连云港222005；江苏海洋大学海洋资源与环境学院，江苏连云港222005 |
引用文本：
津ICP备20000603号-1