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投稿时间：2017-05-12
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中文摘要: 以黑曲霉CICIM F0510的互补DNA（complementary DNA，cDNA）为模板，通过PCR扩增出一个新的天冬氨酰氨肽酶基因（vacuolar aspartyl aminopeptidase，vaap），并成功将其在毕赤酵母GS115中进行表达。摇瓶水平上，重组菌GS115（pPIC9K-vaap）的氨肽酶酶活达到39.7 U/mL。该酶的最适反应温度和pH值分别为55℃和9.5；在90℃或pH 8.0～10.0孵育1 h后，该酶仍能保持20%或80%以上的酶活；Sn2+和Co2+对其酶活有明显促进作用，Fe3+、Ca2+、EDTA和SDS对其有抑制作用；该酶对L-亮氨酰对硝基苯胺（Leu-pNA）的Km和Vmax分别是12.96 mmol/L和2.14 μg/（mL·min）。在所测的8种底物中，Leu-pNA是Vaap最适底物，且它对丙氨酸对硝基苯胺（Ala-pNA·HCl）和赖氨酸对硝基苯胺（Lys-pNA·2HCl）也有一定的水解能力。
Abstract:In the present study，using complementary DNA （cDNA）of Aspergillus niger CICIM F0510 as the template，a novel gene （vaap）encoding aspartyl aminopeptidase was amplified by PCR and then successfully expressed in Pichia pastoris GS115.At the shake-flask level，the aminopeptidase activity of recombinant strain GS115 （pPIC9K-vaap）was 39.7 U/mL.The optimum temperature and pH of recombinant enzyme Vaap were shown to be 55℃ and 9.5，respectively.After incubation at 90℃or pH 8.0-10.0 for 1 h，this enzyme retained 20%or 80%of its initial activity.The activity of Vaap was significantly enhanced by Sn2+and Co2+，but inhibited by Fe3+，Ca2+，EDTA and SDS.Its Kmand Vmaxvalues towards L-leucine-pnitroanilide （Leu-pNA）were determined to be 12.96 mmol/L and 2.14 μg/（mL·min），respectively.Among the eight substrates tested，LeupNA was the preferred substrate for Vaap，and it also hydrolyzed alanine-pnitroanilide（Ala-pNA·HCl）and Lysine-pnitroanilide（Lys-pNA·2HCl）.
文章编号：201724036 中图分类号： 文献标志码：
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